体外细胞毒性试验原则和方法

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　　细胞系和培养基的选择

　　优先采用已建立的细胞系并从认可的贮源获取。试验只能使用无支原体污染细胞，使用前应该检测原代培养细胞是否存在支原体。推荐使用小鼠成纤维细胞或人上皮细胞，如果能证明试验的重现性和精确性，也可选择其他细胞系。使用冻存细胞时，如果有二甲亚砜或甘油等细胞保护剂，应该除去保护剂，使用前至少传代培养一次。传代培养细胞时，采用适合细胞系的酶分散法或机械分散法移出和重悬细胞。

　　培养基应无菌，含血清或无血清培养基应该符合选定细胞系的生长要求，培养基中可以含有对试验无不良作用的抗生素，pH值应该保持在7.2~7.4之间，且培养基的贮存条件应该经过验证才能在此条件下进行保存。

　　体外细胞毒性试验原则

　　体外细胞试验方法较多，且各有其特点，各试验方法之间很难达到完全一致，因此在选择试验方法时，需根据“最接近应用状况”的原则，尽可能合理地选择供试品与细胞的接触方式和检测生物终点评价方法。

　　体外细胞毒性试验方法

　　体外细胞毒性试验具有通用性，可以适用于各种医疗器械和生物材料的评价，GB/T16886.5标准不是规定一个单一的试验方法，而是规定一个试验方案，需要在一系列试验步骤中判断，以选出最合适的试验，试验主要分三类：浸提液试验，直接接触试验和间接接触试验（琼脂扩散试验和滤膜扩散试验）。

　　由于医疗器械产品和材料的多样性，植入机体环境中的变异性，与机体相互作用的复杂性等因素，选择哪种方法进行体外细胞毒性评价，不同的试验人员会有不同的选择。当一个评价项目具有多个试验方法时，应考虑试验的原理、灵敏性、可选性、可定量性、重现性、试验材料的适用性及局限性等因素进行选择。

　　例如浸提液法适合检测溶出物的毒性；直接接触法对材料的细胞毒性敏感性最高，可检测出材料微弱的细胞毒性，间接接触法中的琼脂扩散试验适合于毒性大的大批量材料筛选，滤膜扩散法适合于小分子量毒性材料的评价。以上各种方法因原理不同，各有特点，应根据试验材料本身理化性质、毒性作用强弱及其用途，正确地选择试验方法。

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